1 直接免疫熒光法的操作步驟

標(biāo)本的處理：

石蠟切片經(jīng)脫蠟、梯度酒精脫水后，進(jìn)行抗原修復(fù)，然后用0.01M PBST漂洗5min × 3/次；

?  2%BSA或10%BSA 37 C濕盒內(nèi)封閉30min

?  抗體染色：

–  在標(biāo)本片上滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記抗體(1:8或1:16稀釋)，放在濕盒中，37°C孵育30min；

?  0.0lmol/L PBS(pH 7.4) 漂洗5min × 3/次，不時(shí)震蕩(洗去多余游離的熒光素標(biāo)記的抗體)。

?  緩沖甘油封片

–  分析純無熒光的甘油9份+ pH 9.2，0.2M碳酸鹽緩沖液1份配制。

?  鏡檢：在熒光顯微鏡下觀察。

?  優(yōu)點(diǎn)：方法簡(jiǎn)便、特異性高，非特異性熒光染色少。

?  缺點(diǎn)：敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。若檢測(cè)多種抗原需制備多種相應(yīng)的熒光標(biāo)記抗體。