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這些生化檢測(cè)常用方法,你都會(huì)嗎?


簡(jiǎn)述
     生化檢測(cè)(目前市場(chǎng)所說的癌篩、腫瘤標(biāo)志物、CCVD芯片檢測(cè)法等)簡(jiǎn)單來說,就是檢查發(fā)現(xiàn)您目前是否已患疾病,然后盡可能及早治療,避免再度惡化損害健康。這屬于檢測(cè)的第二個(gè)階段,屬于臨床醫(yī)學(xué)的范疇。

     原理
     生化檢測(cè)是利用生物或化學(xué)的方法來對(duì)血液進(jìn)行檢測(cè)分析,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)人身體健康的定期掌握。主要包括肝功能(總蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比,總膽紅素,直接、間接膽紅素,轉(zhuǎn)氨酶);血脂(總膽固醇,甘油三酯,高、低密度脂蛋白,載脂蛋白);空腹血糖;腎功能(肌酐、尿素氮);尿酸;乳酸脫氫酶;肌酸肌酶等檢測(cè)項(xiàng)目;目前市場(chǎng)上的癌篩、CCVD芯片檢測(cè)等都是屬于生化檢測(cè)范疇,主要包括甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原125(CA125)、糖類抗原15-3(CA15-3)等腫瘤標(biāo)志物的篩查,也只能通過提取血液實(shí)現(xiàn)檢測(cè),可以將表面健康的人區(qū)分為可能患病者(陽性)或可能無病者(陰性),篩查不具有診斷意義。

     常用生化檢測(cè)分析方法
     1.終點(diǎn)法檢測(cè):常用的有總膽紅素(氧化法或重氮法)、結(jié)合膽紅素(氧化法或重氮法)、血清總蛋白(雙縮脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、總膽汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、總膽固醇(膽固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白膽固醇(直接測(cè)定法)、鈣(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、鎂(二甲苯胺藍(lán)法)等。以上項(xiàng)目中,除鈣、磷和鎂基本上還使用單試劑方式分析因而采用一點(diǎn)終點(diǎn)法外,其它測(cè)定項(xiàng)目 都可使用雙試劑故能選用兩點(diǎn)終點(diǎn)法,包括總蛋白、白蛋白測(cè)定均已有雙試劑可用。
     2.固定時(shí)間法:苦味酸法測(cè)定肌酐采用此法。
     3.連續(xù)監(jiān)測(cè)法:對(duì)于酶活性測(cè)定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測(cè)法,如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨?;D(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測(cè)定的項(xiàng)目如己糖激酶法測(cè)定葡萄糖、脲酶偶聯(lián)法測(cè)定尿素等,也可用連續(xù)監(jiān)測(cè)法。
     4.透射比濁法:透射比濁法可用于測(cè)定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的項(xiàng)目,多數(shù)屬免疫比濁法,載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗“O”、類風(fēng)濕因子,以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。

     生化試劑優(yōu)缺點(diǎn)
     生化試劑,目前有單試劑、雙試劑,甚至有三試劑,其各自的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),中洪博元小編建議根據(jù)以下內(nèi)容來進(jìn)行選擇。


     單試劑優(yōu)點(diǎn): 省事,方便,節(jié)省試劑位,生化分析儀同時(shí)測(cè)定項(xiàng)目數(shù)增加。 

          缺點(diǎn):抗干擾能力太差,但通過雙波長(zhǎng)測(cè)定可以減少干擾;而TG、CHO等Trinder反應(yīng)的單試劑,更易受到血清中Vc的影響,造成結(jié)果偏低。
     

雙試劑 優(yōu)點(diǎn):抗干擾能力非常強(qiáng)、對(duì)于某些特殊項(xiàng)目,如HDL、CRE,如果單試劑,是無法完成的
                 缺點(diǎn):占更多的試劑位,增加試劑耗材成本。

     血清白蛋白(Alb)(溴甲酚綠法BCG)

試劑 
     1. 溴甲酚綠(BCG)貯存液:取BCG 419mg,用10ml 0.1mol/L NaOH溶解,加NaN3 100mg ,定容至1000mL。貯于棕色瓶備用。如用溴甲酚綠鈉鹽應(yīng)稱取432mg.加水溶解。 
     2. 0.1mol/L檸檬酸緩沖液(pH 4.2):分別配制0.1mol/L檸檬酸和檸檬酸鈉溶液,然后按12.3:7.7的體積比例混合。每1000ml混合液加入NaN3 100mg。 
     3. 30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液:取Brij-35 30g,加少量水,60℃水浴溶解,加水至100ml(此可用Tween-20或Tween-80代替)。 
     4. BCG應(yīng)用液:BCG貯存液250ml,0.1mol/L檸檬酸緩沖(pH4.2)750ml,30%Brij-35 8ml(也可以用Tween-20 8ml或Tween-80 10ml代替)混合而成。 5.標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液(10mg/ml):稱取白蛋白1.00g,用生理鹽水。

白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 
     (1) 稀釋白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液:分別精密量取白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液0.10 mL,0.20 mL,0.40 mL,0.60 mL于試管中,再在每個(gè)管中依次加入蒸餾水0.9 mL,0.8 mL,0.6 mL,0.4 mL,混勻,得到稀釋后白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液含量分別為1.0 mg/ml,2.0 mg/ml,4.0 mg/ml,6.0 mg/ml。 

     (2) 分別精密量取每個(gè)不同濃度稀釋白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液0.2mL于試管中,空白管加入生理鹽水0.2mL,設(shè)平行樣,再在每個(gè)管中加入BCG應(yīng)用液5.0mL,混勻后以空白管調(diào)零,立即于紫外分光光度計(jì)測(cè)吸光值,吸收波長(zhǎng)620mn,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得出線性方程。 

     (3) 樣品血清白蛋白測(cè)定:用生理鹽水按1:10的比例稀釋血清,取稀釋后的血清0.2ml按上述方法測(cè)出其吸光值,求得其白蛋白含量。

     注意事項(xiàng):
     1.BCG是一種PH指示劑,變色域?yàn)镻H3.8(顯黃色)~5.4(顯藍(lán)綠色),因此控制反應(yīng)液的PH是本法測(cè)定的關(guān)鍵。
     2.配制BCG試劑也可用其他緩沖液如枸椽酸鹽或乳酸鹽緩沖液。但以琥
珀酸緩沖液的校正曲線通過原點(diǎn),線性好,靈敏度高,成為首選推薦配方。 
     3.試劑中的Brij-35也可用其他表面活性劑代替,如吐溫20或吐溫80,
終濃度為2ml,靈敏度和線性范圍不變。 
     4.當(dāng)白蛋白標(biāo)準(zhǔn)與BCG結(jié)合后,溶液光徑1,在630處測(cè)定的吸光度應(yīng)
為0.811±0.035,如達(dá)不到此值,表示靈敏度較差。 
     5.蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液是一個(gè)復(fù)雜的問題,實(shí)驗(yàn)證明,BCG不但與白蛋白呈色,
而且與血清中多種蛋白質(zhì)成分呈色,其中以球蛋白、運(yùn)鐵蛋白、結(jié)合珠蛋白更為顯著,其反應(yīng)速度較白蛋白稍慢。由于30S內(nèi)呈色對(duì)白蛋白特異,故BCG與血清混合后,在30S內(nèi)讀取吸光度,可明顯減少非特異性呈色反應(yīng)。

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