目的：構(gòu)建猴D型逆轉(zhuǎn)錄病毒p27蛋白，建立檢測(cè)猴D型逆轉(zhuǎn)錄病毒的流式免疫熒光微球檢測(cè)技術(shù)。

　　方法：p27基因片段經(jīng)PCR擴(kuò)增，連接pGEX-4T-1表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化BL21（DE3）表達(dá)。 SDS-PAGE 分析蛋白質(zhì)表達(dá)的形態(tài)和最佳誘導(dǎo)時(shí)間。 GST樹脂用于純化目的蛋白，用磁珠包被，建立流動(dòng)免疫熒光微球檢測(cè)技術(shù)，用于臨床樣品檢測(cè)。

　　結(jié)果：重組蛋白在可溶性上清液中表達(dá)，最佳誘導(dǎo)時(shí)間為4小時(shí)。包覆磁珠后，我們成功建立了流式免疫熒光微球檢測(cè)技術(shù)。陽性血清在稀釋 81 倍后仍可檢測(cè)為陽性。不與其他猴病原體的陽性血清發(fā)生交叉反應(yīng)，特異性強(qiáng)。 ..可與ELISA法同時(shí)使用。測(cè)試了二十四個(gè)臨床樣本。其中三個(gè)樣本的流動(dòng)免疫熒光微球測(cè)試結(jié)果為陽性，兩個(gè) ELISA 測(cè)試結(jié)果為陽性，一個(gè)為陰性。兩種方法均為96?

　　結(jié)論：成功表達(dá)猴D逆轉(zhuǎn)錄病毒p27蛋白，利用該蛋白建立流式免疫熒光微球檢測(cè)技術(shù)，靈敏度高、特異性強(qiáng)、樣品需求量低，后續(xù)多流式用于推廣應(yīng)用。熒光抗體法微球檢測(cè)技術(shù)奠定了基礎(chǔ)。