簡(jiǎn)介：肥胖患病率的增加正成為一個(gè)醫(yī)學(xué)和公共衛(wèi)生問(wèn)題，因?yàn)榉逝峙c代謝異常密切相關(guān)，包括高脂血癥、非酒精性脂肪肝（NAFLD）、2型糖尿?。═2D）和心血管疾病。大量研究表明，肥胖在胰島素抵抗（IR）和T2D的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，人們普遍認(rèn)為肥胖引起的血脂異常是導(dǎo)致IR和T2D發(fā)生發(fā)展的主要因素，其特點(diǎn)是血脂含量增加，特別是三酰甘油（TG）和游離脂肪酸（FFA）T2D型。然而，將血脂異常與IR和T2D聯(lián)系起來(lái)的確切機(jī)制仍然知之甚少。因此，明確肥胖引起IR和T2D的發(fā)病關(guān)鍵因素，尤其是在疾病進(jìn)展的早期，顯得尤為重要和緊迫。非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物（NHPs）如恒河猴（Macaca mulatta）和食蟹猴（macacafcicularis）由于在遺傳學(xué)和生理學(xué)上與人類(lèi)高度相似，特別適合用于生物醫(yī)學(xué)研究。雖然高熱量飲食很容易誘發(fā)肥胖，但許多報(bào)告已令人信服地證明，自發(fā)性肥胖在NHPs中很常見(jiàn)，而且它們顯示出與肥胖相關(guān)的生理變化，包括腹部脂肪增加、體重指數(shù)（BMI）以及血脂異常IR和T2D，與人類(lèi)相似。因此，NHPs經(jīng)常被用作肥胖和肥胖相關(guān)代謝疾病的有價(jià)值的研究模型。脂質(zhì)組學(xué)代表全球脂質(zhì)種類(lèi)的模式，并提供許多有希望的新型脂質(zhì)生物標(biāo)志物和有價(jià)值的信息，以闡明常見(jiàn)的復(fù)雜疾?。ㄈ缪惓：头逝职Y）的發(fā)病機(jī)理。隨著新型檢測(cè)和分析技術(shù)的出現(xiàn)，在血漿和組織中進(jìn)行全面的脂質(zhì)組分析成為可能。 以前，我們篩選了一定數(shù)量的自發(fā)性肥胖和糖尿病恒河猴。選擇三只BMI為40 kg / m2或更高且年齡在12至18歲的雌性肥胖猴子，隨后在1年內(nèi)監(jiān)測(cè)其代謝指標(biāo)，它們顯示出血脂異常，脂肪肝和IR，與人類(lèi)早期T2D相似。在本研究中，我們對(duì)正常和自發(fā)性肥胖的猴子進(jìn)行了血漿脂質(zhì)體分析，以確定肥胖和胰島素抵抗的潛在脂質(zhì)生物標(biāo)志物或疾病因素。

　　動(dòng)物和血漿樣本收集：我們?cè)谙惹暗难芯恐忻枋隽擞糜诤Y選自發(fā)肥胖猴子的標(biāo)準(zhǔn)，肥胖定義為體重指數(shù)為40?kg/m2或更高。三只個(gè)體肥胖（OB）雌性猴子和三只年齡相似（12-18?歲）的正常（CK）雌性猴子被確定用于本研究。所有猴都可以隨意飲水和進(jìn)食，包括21.6％的卡路里（蛋白質(zhì)），5.4％（脂肪）和56.6％（碳水化合物）。用劑量為20 mg/kg的氯胺酮對(duì)猴實(shí)施安樂(lè)死。在禁食條件下，從股靜脈采集血液到含乙二胺四乙酸（EDTA）的試管中，然后在3000?rpm下室溫離心5?min。離心后，將血漿保存在-80°C下進(jìn)行進(jìn)一步研究。

　　血漿脂肪酸成分的氣相色譜/質(zhì)譜（GC / MS）分析：按照先前報(bào)道的方法對(duì)血漿脂肪酸進(jìn)行甲基化，但稍作修改。簡(jiǎn)言之，在Pyrex管中加入20μL己烷內(nèi)標(biāo)物，其中含有1?mg/mL庚烷酸甲酯、0.5?mg/mL三羧酸甲酯和28?mg/mL丁基化羥基甲苯（BHT），然后加入50μL血漿和1?mL甲醇/己烷混合物（4:1，v/v）。在自制的液氮浴中冷卻試管10分鐘后，向混合物中加入100微升預(yù)冷的乙酰氯，然后用氮?dú)舛虝簺_洗。然后將試管旋蓋，并避光于室溫保持24小時(shí)。 將得到的混合物在冰浴中放置10分鐘，然后逐漸加入2.5mL的6％K2CO3溶液（搖動(dòng)）以中和。將混合物靜置10分鐘，并將頂層轉(zhuǎn)移至玻璃樣品瓶中。 將該提取過(guò)程進(jìn)一步重復(fù)兩次，并將合并的上清液蒸發(fā)至干。將得到的殘留物重新溶解在50μL己烷中，然后進(jìn)行GC-火焰電離檢測(cè)器（FID）/ MS分析。甲基化脂肪酸在島津GC/MS-QP2010 PLUS光譜儀上進(jìn)行了測(cè)定，該光譜儀配備有電子沖擊（EI）離子源和氫火焰離子化檢測(cè)器。采用Agilent DB-225毛細(xì)管氣相色譜柱（10?m，0.1?mm內(nèi)徑，0.1?μm膜厚），進(jìn)樣量為1?μL，分流比為1:60。氦氣作為載體和補(bǔ)充氣體。進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度均設(shè)置為230°C。柱溫設(shè)置為55°C，持續(xù)1分鐘，然后以30°C/min的速率增加至205°C。然后將柱溫在205°C下保持3°min，然后升至230°C（5°C / min）。在EI電壓為70?eV，m/z范圍為45～450的條件下獲得了質(zhì)譜圖。甲基化脂肪酸通過(guò)與37種已知標(biāo)準(zhǔn)品混合物的色譜圖進(jìn)行比較來(lái)鑒定，并用其質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)。利用信號(hào)積分和內(nèi)標(biāo)的FID數(shù)據(jù)對(duì)每種脂肪酸進(jìn)行定量。結(jié)果表示為每升血漿中脂肪酸含量為 μmol。使用超高效液相色譜/質(zhì)譜分析血漿游離脂肪酸。使用UPLC-MS分析血漿磷脂和鞘脂。

　　結(jié)果：肥胖猴的FFA水平升高：我們先前報(bào)告確定了一組自發(fā)性肥胖恒河猴，其體重、BMI、血清和肝臟TG含量顯著增加，并且有輕度胰島素抵抗。為了確定與肥胖和胰島素抵抗有關(guān)的潛在脂質(zhì)生物標(biāo)志物或疾病因素，還同時(shí)收集了先前用于肝蛋白質(zhì)組分析的三只肥胖（OB）和正常（CK）猴的血樣，同時(shí)用于脂質(zhì)組學(xué)分析。采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC/MS）法測(cè)定脂肪酸的種類(lèi)。雖然血漿總脂肪酸水平?jīng)]有差異，但肥胖猴的棕櫚油酸（C16:1）和花生四烯酸（C20:4）水平均顯著高于正常猴。許多研究報(bào)道FFAs水平的升高與胰島素抵抗的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。因此我們檢測(cè)了血漿游離脂肪酸水平。與正常猴相比，肥胖猴的FFA水平顯著升高。與人類(lèi)結(jié)果一致，在猴血漿中八種游離脂肪酸中，棕櫚酸（C16:0）是主要組成脂肪酸。值得注意的是，除了C20:4和C20:5含量太低外，肥胖猴體內(nèi)C16:0、C16:1、C18:1、C18:2和C20:6五種脂肪酸的含量都比正常猴高。綜上所述，這些結(jié)果表明肥胖猴子的FFA水平也增加了，這與人類(lèi)和嚙齒動(dòng)物的肥胖模型是一致的。

　　血漿磷脂和鞘脂的分布：采用UPLC/MS技術(shù)對(duì)正常和肥胖猴的血漿磷脂（PL）和鞘脂（SM）進(jìn)行了檢測(cè)。從磷脂酰膽堿（PC），磷脂酰乙醇胺（PE），磷脂酰肌醇（PI），磷脂酰絲氨酸（PS），磷脂酰甘油（PG），溶血磷脂酰膽堿（LPC），溶血磷脂酸（LPA）中鑒定，定量和分類(lèi)了總共129種脂質(zhì) 和SM。 在八類(lèi)脂質(zhì)種類(lèi)中，PC是最豐富的脂質(zhì)類(lèi)別，其次是SM，LPC和PI?？傊?，與正常猴相比，肥胖猴的血漿PC，SM和LPA含量有所增加，而血漿PE含量則略有下降。

　　肥胖猴的磷脂酰膽堿（PC）含量增加：共檢測(cè)到42種PC，其中17種PC的平均濃度大于50?nmol/mL，25種PC的平均濃度小于50?mmol/mL。另外，8種含C14:0脂肪酸的PC的濃度均低于10?nmol/mL。一般來(lái)說(shuō)，與正常猴相比，肥胖猴體內(nèi)大多數(shù)PC種類(lèi)的水平都略有增加。如上所述，肥胖猴體內(nèi)的脂肪酸C16:1和C20:4水平顯著升高。與正常猴相比，肥胖猴子中所有四種C20：4的PC水平，一半的C16：1的PC水平顯著增加。這些結(jié)果表明，脂肪酸C20：4升高的水平可能來(lái)自PC，而不是FFA。肥胖猴的磷脂酰乙醇胺（PE）含量下降。肥胖猴的鞘磷脂（SM）含量增加。

　　結(jié)論：總之，我們?cè)诤愫雍镏械脑S多發(fā)現(xiàn)與嚙齒動(dòng)物和人類(lèi)的報(bào)告一致。同時(shí)，我們還發(fā)現(xiàn)了一種新的脂質(zhì)種類(lèi)16:0-LPA，在肥胖猴體內(nèi)的水平升高。這些脂質(zhì)種類(lèi)，尤其是FFA C16：0和16：0-LPA發(fā)生改變，可能是肥胖相關(guān)疾病的診斷和研究對(duì)象。