目的：在真核細(xì)胞中表達(dá)人Wnt7b基因并且觀察對(duì)大鼠原代軟骨細(xì)胞的退變作用。

　　方法：取出生24 h SD大鼠關(guān)節(jié)處軟骨，Ⅱ型膠原酶多次消化后獲得原代軟骨細(xì)胞，取P1 代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。擴(kuò)增人Wnt7b 基因及克隆至PCDH-GFP 上，轉(zhuǎn)染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b 至293ft 細(xì)胞中，48 h 后收集細(xì)胞上清及轉(zhuǎn)染細(xì)胞，Western blot 鑒定Wnt7b 在293ft 細(xì)胞中的表達(dá)。收集的上清分別稀釋10倍和50倍培養(yǎng)大鼠軟骨細(xì)胞，24 h后觀察細(xì)胞形態(tài)并收集細(xì)胞蛋白和抽提RNA，Western blot和定量PCR檢測(cè)軟骨退變指標(biāo)MMP13、MMP3、Ⅱ型膠原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表達(dá)。

　　結(jié)果：成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP載體上且在293ft細(xì)胞中得到有效表達(dá)。含Wnt7b培養(yǎng)基干預(yù)軟骨細(xì)胞24 h后，軟骨細(xì)胞形態(tài)由原來(lái)的多角形變成長(zhǎng)梭形，Wnt7b處理組軟骨細(xì)胞MMP13和MMP3表達(dá)顯著上調(diào)，Ⅱ型膠原的表達(dá)下調(diào)。PCR結(jié)果表明A-can和Sox9表達(dá)下降，ColⅩ和ADAMTS5表達(dá)增強(qiáng)。

　　結(jié)論：有效在真核細(xì)胞中表達(dá)Wnt7b基因并且促進(jìn)大鼠軟骨細(xì)胞退變，建立軟骨細(xì)胞退變的體外模型。