目的: 討論bcl-2基因修飾神經(jīng)干細(xì)胞移植對脊髓損傷大鼠損傷神經(jīng)功用恢復(fù)的影響。
辦法: 體外培育大鼠神經(jīng)干細(xì)胞,經(jīng)Ad-EGFP為載體介導(dǎo)端B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(bcl-2)基因轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞,分為3組:對照組、陰性轉(zhuǎn)染組、bcl-2轉(zhuǎn)染組。Western-blot檢測神經(jīng)干細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前后bcl-2蛋白的表達(dá)。成年雌性SD大鼠85只,造模勝利72只,隨機(jī)分為對照組,NSCs組,bcl-2-NSCs組,24只/組,依照改進(jìn)的Allen打擊法樹立大鼠急性脊髓損傷模型。經(jīng)過BBB評分、斜板實(shí)驗(yàn)停止運(yùn)動功用評定。造模后7 d經(jīng)過RT-PCR及Western-blot檢測檢測脊髓損傷區(qū)四周HSP27、c-fos基因的表達(dá),TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡狀況。造模后4周取材行病理切片HE染色及熒光顯微鏡觀測EGFP標(biāo)志的NSC存活及散布狀況,經(jīng)過SEP和MEP察看大鼠神經(jīng)電生理恢復(fù)狀況。
結(jié)果: bcl-2基因轉(zhuǎn)染大鼠神經(jīng)干細(xì)胞后,bcl-2轉(zhuǎn)染組與對照組、陰性轉(zhuǎn)染組相比bcl-2基因和蛋白程度均有表達(dá)(P<0.05);大鼠下肢運(yùn)動功用評價(jià)bcl-2-NSCs組優(yōu)于NSCs組,NSCs組優(yōu)于對照組。造模后72 h,bcl-2-NSCs組細(xì)胞凋亡數(shù)均明顯低于對照組和NSCs組(P<0.05)。造模后7 d,與對照組和NSCs組相比,bcl-2-NSCs組HSP27基因和蛋白的表達(dá)均較顯著升高(P<0.05),bcl-2-NSCs組c-fos基因和蛋白的表達(dá)較顯著降低(P<0.05)。造模后4周,HE染色對照組可見脊髓組織缺失及脊髓空泛構(gòu)成,無神經(jīng)軸索經(jīng)過。NSCs組損傷區(qū)可見少量神經(jīng)軸索樣構(gòu)造,脊髓空泛較小,bcl-2-NSCs組可見較多神經(jīng)軸索樣構(gòu)造,未見脊髓空泛。EGFP標(biāo)志的陽性細(xì)胞數(shù):bcl-2-NSCs組最多,NSCs組次之,對照組未見,且各組之間差別有顯著性(P<0.05)。造模后4周,SEP和MEP的埋伏期:bcl-2-NSCs組<NSCS組<對照組,且各組之間差別有顯著性(P<0.05);波幅:bcl-2-nscs組>NSCs組>對照組,且各組之間差別有顯著性意義(P<0.05)。
<NSCS組<對照組,且各組之間差別有顯著性(結(jié)論: 經(jīng)過Ad-EGFP為載體介導(dǎo)端B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(bcl-2)基因轉(zhuǎn)染使神經(jīng)干細(xì)胞可以促進(jìn)體外培育的大鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖。bcl-2基因修飾神經(jīng)干細(xì)胞移植可促進(jìn)脊髓損傷大鼠神經(jīng)突觸的再生,升高脊髓損傷區(qū)HSP27表達(dá),降低脊髓損傷區(qū)bcl-2基因的表達(dá)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡,改善大鼠的肢體運(yùn)動功用和電生理功用。