目的:探究磷脂酶(PLC)Cγ1在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)中的作用及機(jī)制,進(jìn)一步闡明卵母細(xì)胞成熟的分子機(jī)理,為與相關(guān)的人體臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

　　方法:利用Real-time PCR檢測(cè)PLC不同亞型在顆粒細(xì)胞與卵丘細(xì)胞中的表達(dá)情況,構(gòu)建體外卵泡培養(yǎng)模型及COC培養(yǎng)模型研究PLCγ1特異抑制劑U73122對(duì)LH及EGF誘導(dǎo)的減數(shù)分裂恢復(fù)的影響,利用鈣離子熒光探針Fluo3-AM檢測(cè)胞內(nèi)鈣離子水平變化,酶聯(lián)免疫法檢測(cè)胞內(nèi)cGMP水平變化,利用Real-time PCR、Western blot以及免疫組化檢測(cè)不同亞型 4,5-三磷酸肌醇受體(IP3R)的表達(dá)變化情況。

　　結(jié)果:研究表明,顆粒細(xì)胞與卵丘細(xì)胞中Plcγ1mRNA的表達(dá)均顯著高于其它亞型(P<0.05),U73122能夠有效抑制LH和EGF誘導(dǎo)的卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)(P<0.05)以及EGF誘導(dǎo)的卵丘細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平升高(P<0.05),U73122還顯著逆轉(zhuǎn)了EGF介導(dǎo)的胞內(nèi)cGMP水平下降(P<0.05),此外,研究還發(fā)現(xiàn)在顆粒細(xì)胞,卵丘細(xì)胞與卵母細(xì)胞中Itpr1mRNA的表達(dá)量顯著高于其它亞型(P<0.05),Western blot與免疫組化的結(jié)果也表明IP3R1在三種細(xì)胞中均有表達(dá)。

　　結(jié)論:LH-EGFR信號(hào)通過(guò)PLCγ1-IP3R1升高胞內(nèi)鈣離子水平誘導(dǎo)卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)。