目的： 構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的NogginRNAi干擾序列,并分析這些干擾序列對(duì)Noggin基因的沉默效果.

　　方法： 針對(duì)目的基因Noggin的mRNA設(shè)計(jì)四條干擾序列,并將這些序列連接到Lenti-KD慢病毒載體,將重組質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK-293T包裝細(xì)胞,獲得重組慢病毒.將重組病毒感染MC3T3-E1細(xì)胞,利用puromycin進(jìn)行篩選,獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系.通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot技術(shù)分析不同干擾序列的干擾效果.

　　結(jié)果： 實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,四種干擾序列對(duì)Noggin基因的表達(dá)都有一定的沉默效果,但只有shNoggin-1(P<0.01)對(duì)其表達(dá)影響顯著.Western blot結(jié)果顯示,四種干擾序列中只有shNoggin-1(P<0.01)對(duì)Noggin的表達(dá)蛋白具有顯著的降低作用.

　　結(jié)論： 獲得了一種Noggin基因的干擾序列,該序列能夠干擾Noggin基因mRNA的穩(wěn)定性,從而影響蛋白的表達(dá).該干擾序列可以用于部分敲除Noggin基因,從而用于研究Noggin基因的功能.