目的:構(gòu)建并鑒定巨噬細(xì)胞條件性Atg5基因敲除小鼠,為研究巨噬細(xì)胞自噬在腎臟疾病發(fā)病機制中的作用提供動物模型。

　　方法:將引進(jìn)LysM-Cre小鼠與Atg5flox/+小鼠進(jìn)行雜交、Atg5flox/+小鼠自交,分別獲得基因型為Atg5flox/+Cre+/-和Atg5flox/floxCre-/-的子代小鼠;將上述兩種基因型的子代小鼠雜交,得到巨噬細(xì)胞條件性Atg5基因敲除小鼠(Atg5flox/floxCre+/-,Atg5-/-)和對照小鼠(Atg5flox/floxCre-/-,Atg5+/+)。提取小鼠鼠尾組織基因組DNA,經(jīng)PCR擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠電泳后,在DNA水平判斷小鼠基因型;提取小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞RNA和蛋白,利用基因測序和Western blot技術(shù)檢驗Atg5基因的敲除效果。

　　結(jié)果:成功建立巨噬細(xì)胞條件性Atg5基因敲除小鼠模型,該小鼠存活并且可育。在基因及蛋白水平上,巨噬細(xì)胞Atg5基因敲除成功;且與Atg5 小鼠相比,Atg5 小鼠自噬基礎(chǔ)水平低下(p62明顯增多,LC3II明顯減少),對于自噬激活劑雷帕霉素刺激不能恢復(fù)到正常基礎(chǔ)水平。

　　結(jié)論:利用Cre/loxp系統(tǒng),本研究成功構(gòu)建并鑒定出條件性巨噬細(xì)胞Atg5基因敲除小鼠,為在動物水平研究巨噬細(xì)胞自噬在腎臟疾病發(fā)病機制中的作用提供研究平臺。