目的:探討核轉(zhuǎn)錄因子TRB?RXR和激動劑T4對長爪沙鼠Cip4基因表達的調(diào)控作用?

　　方法:合成長爪沙鼠Cip4基因啟動子區(qū)序列,構(gòu)建報告載體pGL3-Cip4;將轉(zhuǎn)錄因子TRB?RXR克隆到pcDNA3.1表達載體上?將pGL3-Cip4,pcDNA3.1-TRB,pcDNA3.1-RXR和pRL-TK(參照質(zhì)粒)載體共轉(zhuǎn)染到HEK-293細胞,構(gòu)建Cip4基因的熒光素酶雙報告系統(tǒng)?觀察質(zhì)粒用量?TRB的激動劑甲狀腺素T4等處理對轉(zhuǎn)錄活性的影響?

　　結(jié)果:以長爪沙鼠Cip4啟動子區(qū)為啟動序列的雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)在(啟動子+轉(zhuǎn)錄因子):pRL-TK=20∶1?總質(zhì)粒量為2μg時轉(zhuǎn)染效率最高,并具有最高的熒光素酶活性?檢測結(jié)果顯示,僅加入TRB不改變Cip4的轉(zhuǎn)錄水平(P>0.05),僅加入RXR可以增加Cip4的轉(zhuǎn)錄水平(P<0.05),RXR與T4共同作用可上調(diào)Cip4的轉(zhuǎn)錄水平(P<0.001)?TRB與T4共同作用可下調(diào)Cip4活性(P<0.05)?RXR?TRB?T4共存時,Cip4的轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào)(P<0.01)?

　　結(jié)論:本研究證實了T4?TRB及RXR共調(diào)控長爪沙鼠Cip4基因的轉(zhuǎn)錄,模擬了配體激活型轉(zhuǎn)錄因子TRB/RXR活化目的基因Cip4的轉(zhuǎn)錄,同時證實了Cip4的轉(zhuǎn)錄活化與RXR信號通路密切相關(guān),為揭示甲狀腺素在人類NAFLD中的作用機制奠定了基礎(chǔ)?本報告基因系統(tǒng)可用于配體激活型轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控Cip4基因表達的機理分析及相關(guān)藥物的篩選?