目的:狨猴血清中純化 IgG 抗體,制備兔抗狨猴抗血清,并純化抗血清中 IgG,HRP(辣根過(guò)氧化物 酶)標(biāo)記兔抗狨猴 IgG。
方法: HiTrap TM Protein G 親和層析純化狨猴和兔抗狨猴血清 IgG,十二烷基硫酸鈉聚丙烯 酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定,免疫瓊脂雙擴(kuò)散法測(cè)定制備的兔抗狨猴 抗血清效價(jià),改良“簡(jiǎn)易過(guò)碘酸鈉標(biāo)記法”制備兔抗狨猴 IgG?HRP 標(biāo)記抗體,酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法及蛋白 免疫印跡法對(duì)兔抗狨猴 IgG?HRP 標(biāo)記抗體進(jìn)行工作濃度測(cè)定及特異性鑒定。
結(jié)果:狨猴和兔抗 狨猴血清純化 IgG 純度分別大于 95% 、97% ;兔抗狨猴 IgG 抗血清的效價(jià)為 1∶ 64。 ELISA 和 Western blotting 鑒定了 兔抗狨猴 IgG?HRP 酶標(biāo)抗體參考工作濃度為 1∶ 256 000、1∶ 15 000,特異性明顯。
結(jié)論:制備狨猴 IgG?HRP 標(biāo)記抗 體并初步鑒定,包括 ELISA 及 Western blotting 的特異性及使用濃度,為狨猴病原體免疫學(xué)檢測(cè)體系及分子免疫學(xué) 檢測(cè)體系儲(chǔ)備了資源。