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【動物實(shí)驗外包服務(wù)】-山羊肺泡巨噬細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定

  目的: 建立一種高純度的肺泡巨噬細(xì)胞分離培養(yǎng)方法,為研究巨噬細(xì)胞生物學(xué)特性,開展細(xì)胞內(nèi)寄生菌存活機(jī)理研究提供材料。

  方法: 在無菌環(huán)境下以PBS多次灌洗山羊肺臟,收集細(xì)胞后,用外周血單核細(xì)胞分離液結(jié)合密度梯度離心法從混合細(xì)胞中分離出羊肺泡巨噬細(xì)胞;培養(yǎng)于含10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),并利用其對雞紅細(xì)胞的吞噬功能檢測細(xì)胞活性;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測單核巨噬細(xì)胞表面特征性標(biāo)志CD14。

  結(jié)果: 獲得的貼壁細(xì)胞具典型的巨噬細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征,有偽足和突起伸出,呈現(xiàn)圓形及不規(guī)則形狀,胞漿豐富,胞體較大;培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞54.5%吞噬了雞紅細(xì)胞,具有較強(qiáng)的吞噬活性;在體外連續(xù)培養(yǎng)近一個月,仍有93.7%的細(xì)胞能特異性表達(dá)CD14抗原,具有巨噬細(xì)胞特異性免疫表型。

  結(jié)論: 本研究獲得的山羊肺泡巨噬細(xì)胞純度高、生物活性好,為開展細(xì)胞內(nèi)寄生菌的疾病機(jī)理研究提供了細(xì)胞模型。

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