目的： 分離并鑒定犬副流感病毒，并對該病毒N、HN和F基因進(jìn)行序列分析,研究其遺傳變異情況;為CPIV診斷、治療以及預(yù)防奠定分子生物學(xué)基礎(chǔ)。

　　方法： 用Vero細(xì)胞接種感染CPIV陽性犬肺組織,盲傳3代,觀察病變情況,收集72 h培養(yǎng)液進(jìn)行PCR鑒定、血凝特性以及形態(tài)學(xué)觀察。同時,用3對特異性引物,擴增N、HN和F全基因,進(jìn)行序列測定和分析,并制作系統(tǒng)進(jìn)化樹。

　　結(jié)果： 從犬肺中成功分離出一株犬副流感病毒,并命名為QF20100726。該病毒能凝集豚鼠、豬、雞和人O型血,電鏡觀察病毒呈圓形、長絲狀等形態(tài)多樣、大小不等的顆粒狀;序列分析表明,與人源、犬源等10株有代表性的副流感病毒基因相比,N基因核苷酸同源性為 95.7%~99.8%,氨基酸同源性為97.4%~99.6%,其中有兩處氨基酸發(fā)生新的變異,分別是第257位由V變成了A,第301位由A變成了T;HN基因核苷酸同源性為95.5~99.8%,氨基酸同源性為96.3~99.6%,F基因核苷酸同源性為94.7%~99.6%,氨基酸同源性為 95.6%~99.3%。有兩處發(fā)生特異變異,分別是56位由T變成了S,89位由T變成了M。

　　結(jié)論： 成功分離犬副流感病毒QF20100726分離株,其血凝特性及超微形態(tài)特征均符合CPIV特性,N、HN和F全基因生物進(jìn)化樹顯示,該分離株與犬副流感病毒分離株08-1990(登錄號:KC237063)親緣關(guān)系最近;N基因氨基酸在第257位(由V變成了A)和第301位(由A變成了T),F基因氨基酸在第56位(由T變成了S)和89位(由T變成了M)發(fā)生了特異性變異。這些數(shù)據(jù)將為CPIV的防控奠定基礎(chǔ)。