免疫組化實(shí)驗(yàn)小細(xì)節(jié)
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發(fā)布時(shí)間：2017-11-20
一、免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本有哪些？
所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類(lèi)，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本最常用、最基本的方法，對(duì)于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對(duì)照觀察；還能長(zhǎng)期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過(guò)程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中首選的組織標(biāo)本制作方法。
二、石蠟切片和冰凍切片的比較？
（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片，可能會(huì)破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可做石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可做冰凍切片。
（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可能會(huì)使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒(méi)石蠟的漂亮。當(dāng)你買(mǎi)一抗時(shí)，目錄上都寫(xiě)著做什么樣的切片，如果它寫(xiě)著只能做冰凍，就不能做石蠟，如寫(xiě)著兩者都可，那就都能做。
（3）石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)是可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，且容易存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在 -80ºC 的低溫冰箱中，尤其是用來(lái)做原位雜交的切片，為了防止 RNA 降解，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到 4 μm 左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
三、石蠟切片在染色過(guò)程中出現(xiàn)脫片現(xiàn)象？
（1）烤片時(shí)間不夠，或溫度不夠，可以延長(zhǎng)烤片時(shí)間和提高烤片溫度；
（2）用含有多聚賴(lài)氨酸的玻片，可以購(gòu)買(mǎi)到或這自己做；
（3）有些組織本身就容易掉片，如骨組織等，操作時(shí)沖PBS不要直接沖到組織上，沖到組織上方，讓它流下沖洗組織；
（4）用高溫修復(fù)時(shí)，溫度驟冷也可能引起。
