免疫學(xué)檢測是根據(jù)抗原、抗體反應(yīng)的原理,利用已知的抗原檢測未知的抗體或利用已知的抗體檢測未知的抗原,可以定性、定位和定量地檢測某一特異蛋白。金開瑞可提供蛋白印跡(WB)、免疫組化(IHC)、免疫沉淀(IP)、免疫熒光(IF)、酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)、染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)等。
Western blot(WB)——蛋白印跡
WB技術(shù)利用抗體與組織或細胞樣品中特定蛋白的特異性結(jié)合作用,根據(jù)顯色條帶的位置和強弱實現(xiàn)蛋白鑒定和表達分析。其具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,選用合適的內(nèi)參抗體能夠校正蛋白定量和上樣過程中的誤差,通過灰度計量可以定性或定量分析不同樣品中蛋白表達情況。
Immunohistochemistry(IHC)——免疫組化
IHC技術(shù)利用特異性抗體與組織細胞原位抗原結(jié)合,通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原,對其進行定位、定性及定量的研究。其特點在于切片制作過程中保持組織、細胞的原有結(jié)構(gòu)及形態(tài),因此可以反應(yīng)目標抗原在組織結(jié)構(gòu)中的分布以及亞細胞定位。組織細胞定位往往是生理功能發(fā)揮或變化的體現(xiàn),是研究中常常關(guān)注的因素。
Immunoprecipitation(IP)——免疫沉淀
IP技術(shù)是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集樣品中目的蛋白的一種方法。通常使目標蛋白同抗體-protein A/G形成免疫復(fù)合物沉淀而得以收集,然后通過western blot檢測目的蛋白。
Co-IP技術(shù)是將樣品中同抗體靶蛋白相互作用的蛋白一同隨免疫復(fù)合物沉淀,檢測兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)存在相互作用,確定一種蛋白在體內(nèi)的相互作用蛋白。
Immunofluorescence(IF)——免疫熒光
IF技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù),將抗體分子與一些示蹤標記結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位和定量。
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)——酶聯(lián)免疫吸附測定
ELISA技術(shù)以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實驗技術(shù)。不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定樣品中的抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。
Chromatin immunoprecipitation assay( ChIP)—— 染色質(zhì)免疫沉淀
ChIP技術(shù)是將樣品中同抗體靶蛋白相互作用的DNA隨免疫復(fù)合物沉淀,是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的有力工具,可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動態(tài)作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾以及轉(zhuǎn)錄因子與基因表達的關(guān)系。
(本文轉(zhuǎn)載丁香通)