目的：應用RNA干擾技術(shù)抑制自噬調(diào)控基因Beclin 1的表達,檢測Beclin 1表達對裸鼴鼠皮膚成纖維細胞增殖與凋亡的影響以及p53、BAX、Bcl2等基因表達的影響。

　　方法：分別檢測裸鼴鼠成纖維細胞經(jīng)饑餓、H2O2刺激等處理后Beclin 1的表達,然后采用設計的Beclin l基因的干擾RNA及陰性對照分別瞬時轉(zhuǎn)染裸鼴鼠成纖維細胞。采用real-time PCR及Western blot法檢測沉默效果后,采用CCK-1實驗檢測沉默后細胞增殖活性,流式細胞儀檢測細胞凋亡情況,然后采用Western blot檢測相關(guān)基因蛋白表達水平。

　　結(jié)果：饑餓與H2O2刺激均能導致Beclin 1表達水平的改變。采用gene expresso轉(zhuǎn)染試劑對裸鼴鼠皮膚成纖維細胞轉(zhuǎn)染效率可達到90%以上,real-time PCR及Western blot結(jié)果顯示所設計的Beclin 1 siRNA可有效降低Beclin 1的表達。Beclin 1基因沉默后,裸鼴鼠皮膚成纖維細胞增殖抑制率均顯著高于對照組,細胞早期凋亡與晚期凋亡率均顯著升高,同時p53、BAX、Bcl2、LC3B、p-AKT、mTOR等表達量下降。

　　結(jié)論：Beclin 1在裸鼴鼠成纖維細胞抵抗饑餓、H2O2刺激等過程中表達量顯著變化,同時抑制Beclin 1的表達,可抑制裸鼴鼠細胞增殖,促進其凋亡,這提示Beclin 1基因?qū)β泯B鼠自噬、增殖、凋亡起到調(diào)控作用。