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【動物實驗外包服務(wù)】-大鼠雪旺細(xì)胞系RSC96條件培養(yǎng)液對少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的體外增殖作用

  目的:觀察大鼠雪旺細(xì)胞系RSC96細(xì)胞條件培養(yǎng)基(RSC96-CM)對少突膠質(zhì)祖細(xì)胞(OPC)增殖的影響并探討其作用機(jī)制。

  方法:使用免疫粘附法從胚胎15天SD大鼠脊髓中分離OPC,使用BrdU攝取實驗檢測OPC增殖,使用RT-PCR檢測RSC96細(xì)胞中的PDGF-檢測AA和bFGF的表達(dá)。 ELISA技術(shù)檢測RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF蛋白濃度,并使用特異性抑制劑ERK和JNK觀察PDGF-AA和bFGF對RSC96-CM誘導(dǎo)的OPC生長的影響,觀察信號通路的作用。SC96-CM 在誘導(dǎo)某些抑制劑 OPC 生長中的作用。

  結(jié)果:與對照組相比,不同濃度RSC96-CM培養(yǎng)的OPCs的BrdU+細(xì)胞比例顯著增加(Pu003c0.05)。其中,在含有 50?SC96-CM 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的 OPC 在 BrdU + 細(xì)胞比例顯著增加時達(dá)到峰值。T-PCR證實RSC96細(xì)胞顯著表達(dá)PDGF-AA和bFGF mRNA。作為ELISA的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)RSC96-CM的PDGF-AA和bFGF的蛋白濃度為0.87,這是B104CM的PDGF-AA和bFGF的蛋白水平。上一份報告。次和 0.92 次。 PDGFRAG1295 特異性抑制劑和 bFGFRPD173074 特異性抑制劑均顯著降低了SC96-CM 誘導(dǎo)的 OPC 增殖。此外,Erk 1/2 特異性抑制劑 U0126 和 JNK 特異性抑制 SP600125 的預(yù)孵育。SC96-CM 減少。得出的 BrdU + OPC 比值 (Pu003c0.01)。

  結(jié)論:RSC96-CM通過RSC96分泌的PDGF-AA和bFGF顯著誘導(dǎo)OPC增殖并激活Erk 1/2和JNK信號通路。SC96-CM 也可用作 OPC 日常培養(yǎng)的擴(kuò)增劑。

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