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【動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)】-小鼠肝炎病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立及在部分嚙齒類(lèi)動(dòng)物的應(yīng)用

  目的 樹(shù)立小鼠肝炎病毒(MHV)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)辦法,并初步應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)裸腰鼠等嚙齒類(lèi)動(dòng)物的檢測(cè)。

  辦法 選擇MHVE基因激進(jìn)區(qū)域設(shè)計(jì)合成特異性引物和探針,樹(shù)立熒光定量PCR辦法,并對(duì)辦法特異度、敏感度、線(xiàn)性、反復(fù)性和穩(wěn)定性停止辦法學(xué)考證。同時(shí)用樹(shù)立的辦法對(duì)79只清潔級(jí)小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼴鼠、10只長(zhǎng)爪沙鼠、20只金黃倉(cāng)鼠和4只黃鼠停止MHV檢測(cè)。

  結(jié)果 勝利樹(shù)立了MHV實(shí)時(shí)熒光定量PCR辦法;辦法的線(xiàn)性范圍為(1×101~1×109)拷貝/μL,與仙臺(tái)(SV)病毒、呼腸孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠狀病毒(BCV)均無(wú)穿插反響,辦法的檢測(cè)敏感度為10拷貝/L。反復(fù)性和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)顯現(xiàn)實(shí)驗(yàn)間變異系數(shù)均小于5%。檢測(cè)結(jié)果顯現(xiàn)63只裸鼴鼠、35只SPF小鼠、10只長(zhǎng)爪沙鼠、20只金黃倉(cāng)鼠和4只黃鼠均為陰性。79只清潔級(jí)小鼠MHV陽(yáng)性率為22.78%。樹(shù)立的辦法與RT-PCR比擬,可信度達(dá)97.47%。


  結(jié)論 樹(shù)立的MHV 熒光定量PCR辦法特異、敏感,可以對(duì)多種嚙齒類(lèi)動(dòng)物體內(nèi)攜帶的 MHV 停止檢測(cè)。

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