目的 建立 Marcksl1 基因敲除小鼠,初步探究該基因缺失對造血系統(tǒng)發(fā)育的影響。

　　方法 利用 CRISPR/ Cas9 技術(shù)構(gòu)建 Marcksl1 基因敲除小鼠,通過 PCR 技術(shù)以及 Sanger 測序方法鑒定小鼠基因型。 通過將敲除 小鼠與野生型小鼠雜交,分析敲除小鼠的傳代情況。 通過雜合子小鼠相互雜交,分析發(fā)育不同階段純合子、雜合子 和野生型小鼠的占比。 分離小鼠胎肝,利用血常規(guī)以及流式細(xì)胞術(shù)分析該基因缺失對造血系統(tǒng)的影響。

　　結(jié)果 PCR 結(jié)合 Sanger 測序結(jié)果表明 Marcksl1 基因敲除小鼠構(gòu)建成功。 對不同階段胚胎小鼠基因型鑒定和數(shù)量統(tǒng)計,發(fā) 現(xiàn)小鼠 Marcksl1 基因敲除造成的胚胎死亡發(fā)生于胚胎發(fā)育后期。 通過血常規(guī)與流式細(xì)胞分析,結(jié)果表明 Marcksl1 基因缺失在 E15. 5 d 時不影響白細(xì)胞,紅細(xì)胞以及血小板數(shù)量,但胎肝中造血干細(xì)胞比例顯著增多。

　　結(jié)論 本研究成功建立 Marcksl1 基因敲除小鼠,并發(fā)現(xiàn)該基因缺失影響造血干細(xì)胞占比。 本研究為進一步了解該基因在胚胎發(fā) 育和造血系統(tǒng)中的功能提供動物模型。