目的 本研究建立的轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因近交系裸小鼠(GFP 裸小鼠)已在示蹤研究膠質(zhì)瘤微環(huán)境方面起了重要作用,但在治療自體顱骨成形術(shù)后骨吸收并發(fā)癥的效果及機制方面未見報告,本文旨在分析體外培養(yǎng)GFP裸小鼠顱骨細胞的表形,為治療顱骨吸收準備工具細胞奠定基礎(chǔ)。

　　方法 取生后3d的GFP裸小鼠,在無菌條件下解剖雙側(cè)頂骨,連同骨膜,將顱骨剪成 1 mm2左右的小片,置于含有胎牛血清的1640培養(yǎng)基中,在5% CO2培養(yǎng)箱中作短期傳代培養(yǎng),收集從骨片上長出的細胞作相關(guān)檢測。

　　結(jié)果 對原代(P0)和繼代(P1、P2)細胞觀察表明,在60 mm皿底長滿 90%的傳代時間約6~ 8d,抽樣細胞計數(shù)約2. 3×106 ~ 2. 5×106個/皿,形態(tài)以纖維形為 主,也有星形和樹突狀;在熒光顯微鏡下所有細胞全部發(fā)綠色熒光,形態(tài)與白光鏡下一致;標志蛋白檢測表明,在整個細胞群中同時存在 BMP-6+的成骨祖細胞和CD206+ 、CD68+的巨噬細胞。

　　結(jié)論 基于顱骨再生,除了成骨祖細胞作為起始細胞,還必須有巨噬細胞參與維持環(huán)境穩(wěn)態(tài),培養(yǎng)成功的P0,P1和P2三代細胞因同時滿足這個需要,有望作為工具細胞進一步用于顱骨再生的研究。