目的：建立快速檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠冠狀病毒和仙臺(tái)病毒的雙重PCR方法?

　　方法：根據(jù)大鼠冠狀病毒 N 基因?仙臺(tái)病毒 L 基因設(shè)計(jì)特異性引物;經(jīng)過雙重PCR優(yōu)化,特異性和敏感性的檢測(cè),建立雙重PCR體系? 應(yīng)用該 PCR體系檢測(cè)人工感染仙臺(tái)病毒組織DNA樣本和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織樣本,并與ELISA方法比對(duì)?

　　結(jié)果：雙重PCR擴(kuò) 增出大鼠冠狀病毒(168bp)和仙臺(tái)病毒(262bp)目的條帶,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果利用核酸BLAST功能進(jìn)行同源 序列對(duì)比,仙臺(tái)病毒和大鼠冠狀病毒同源性分別為100%和99%? 仙臺(tái)病毒和大鼠冠狀病毒的檢測(cè)下限為1.56× 102copies/μL? 特異性檢測(cè)對(duì)小鼠肝炎病毒擴(kuò)增,產(chǎn)生片段大小近似大鼠冠狀病毒產(chǎn)物? 應(yīng)用建立的雙重PCR體 系檢測(cè)人工感染仙臺(tái)病毒組織DNA樣本,30份DNA標(biāo)本均被檢出;檢測(cè)94份實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺組織樣本,結(jié)果均陰性?

　　結(jié)論：建立的雙重PCR方法操作簡(jiǎn)單?快速?特異性強(qiáng)?靈敏度高,能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物仙臺(tái)病毒和大鼠冠狀病毒 病原體的快速檢測(cè)?