目的:通過人工感染減蛋綜合征病毒(egg drop syndrome virus,EDSV),觀察病毒在不同品系小鼠體 內(nèi)增殖情況以及動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,為EDSV構(gòu)建載體提供理論依據(jù)與數(shù)據(jù)支持?
方法:選取免疫系統(tǒng)正常的BALB/c 小鼠?T細(xì)胞免疫缺陷裸鼠(Nu)以及高度免疫缺陷小鼠(NSG)為研究對象,每品系32只,雌性,5~ 6周齡,經(jīng)腹腔 注射人工感染EDSV,分別于攻毒后1?3?5?7?14?21?28?35d采集血清,應(yīng)用間接ELISA方法進(jìn)行抗體監(jiān)測;選擇攻 毒后1?7?14?21?28d小鼠,采集心臟?肺?肝?脾?腎?小腸?子宮?氣管?食管?腦10種組織,應(yīng)用熒光定量PCR相對 定量比較Ct法(△△CT)進(jìn)行各組織內(nèi)病毒載量的檢測?
結(jié)果:BALB/c小鼠于攻毒后3d即可在血清內(nèi)檢測到 抗體的表達(dá),14d抗體水平達(dá)到最高,并一直維持至監(jiān)測期內(nèi)35d;Nu小鼠也可于攻毒后3d檢測到抗體,表達(dá)水 平較BALB/c小鼠有所降低,攻毒14d后,Nu小鼠血清中抗體水平出現(xiàn)下降,至35d抗體一直維持在較低的水平; NSG小鼠在整個(gè)監(jiān)測過程中,抗體水平一直處于陰性狀態(tài)? 核酸相對定量結(jié)果顯示,BALB/c小鼠感染后1d,肝組 織中的病毒表達(dá)量最高,達(dá)到5.45個(gè)數(shù)量級,其次由高到低依次是脾?食管?子宮?小腸?肺?氣管?腎?心臟,腦組織 中病毒含量最低,隨感染時(shí)間的延長,各組織內(nèi)病毒表達(dá)量較感染1d均有所下降,至攻毒后28d,肝?脾病毒表達(dá) 量依然維持著較高的水平;Nu小鼠和NSG小鼠感染1d表現(xiàn)為脾中病毒表達(dá)量最高,分別為3.95和4.05個(gè)數(shù)量 級,其次為肝,攻毒28d,兩種小鼠體內(nèi)各器官內(nèi)仍可以檢出陽性信號,肝?脾病毒表達(dá)量較高?
結(jié)論:EDSV可刺 激小鼠產(chǎn)生免疫應(yīng)答,在免疫缺陷小鼠體內(nèi)抗體水平表達(dá)量較低? 該病毒在小鼠體內(nèi)有肝?脾等組織嗜性,為 EDSV開發(fā)成為載體以及在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型上的進(jìn)一步研究與應(yīng)用提供了參考數(shù)據(jù)?