目的:建立分離純化非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠胰島的方法,并對其體內(nèi)外生物學(xué)特性進(jìn)行研究。
方法:采用改良的膠原酶消化結(jié)合Ficoll密度梯度離心方法,分離純化NOD小鼠胰島。應(yīng)用體外糖刺激實(shí)驗(yàn)檢測分離純化的胰島功能,以及通過監(jiān)測移植小鼠的血糖、體重變化及糖耐量實(shí)驗(yàn)對移植胰島的體內(nèi)生物學(xué)功能進(jìn)行分析,并通過HE染色和免疫熒光染色檢測腎被膜下移植胰島的存活情況。
結(jié)果:胰島產(chǎn)率為(116±12)個(gè)胰島/胰腺,純度>90%。體外糖刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,NOD小鼠胰島的糖刺激胰島素釋放水平明顯低于KM小鼠胰島。胰島移植實(shí)驗(yàn)顯示,移植胰島能有效改善糖尿病小鼠的血糖、體重和糖耐量,但改善作用一般僅能維持2周左右。HE染色和免疫熒光染色結(jié)果顯示,腎被膜下可見胰島素陽性的胰島細(xì)胞團(tuán),并且在殘存的移植胰島細(xì)胞團(tuán)周圍存在大量淋巴細(xì)胞浸潤。
結(jié)論:通過改良的小鼠胰島分離方法可由NOD小鼠分離得到大量較高純度的胰島,可用于今后探索如何阻斷自身免疫損傷保護(hù)移植胰島的研究。