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【動物實(shí)驗外包服務(wù)】-小鼠諾如病毒熒光定量PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用

  目的:建立小鼠諾如病毒實(shí)時熒光定量PCR檢測方法,為建立MNV規(guī)范化檢測方法提供依據(jù)。

  方法:根據(jù)NCBI公布的60個MNV病毒株核酸序列設(shè)計特異性引物,構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)陽性質(zhì)控品,建立MNV實(shí)時熒光定量PCR方法,并進(jìn)行特異性、靈敏度、重復(fù)性及穩(wěn)定性評價。用該方法對766只送檢小鼠的盲腸內(nèi)容物樣品進(jìn)行檢測,初步了解北京地區(qū)實(shí)驗小鼠MNV感染狀況。

  結(jié)果:成功建立MNV實(shí)時熒光定量PCR檢測方法,該方法特異性好,與同種屬人類諾如病毒(HuNoVs)、貓杯狀病毒(FCV)均無交叉反應(yīng),檢測靈敏度可達(dá)101 copies/μL。批內(nèi)及批間CT值變異系數(shù)均小于2%。應(yīng)用該方法在766份小鼠盲腸內(nèi)容物樣品中檢出301份MNV核酸陽性樣品,陽性率39.3%。

  結(jié)論:建立的MNV實(shí)時熒光定量PCR檢測方法特異性好,靈敏度高,重復(fù)性好,可以用于MNV的快速定量檢測。

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