目的：應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建miRNA-29b1基因敲除小鼠。

　　方法：針對miRNA-29b1基因設(shè)計(jì)一段sgRNA，sgRNA和Cas9體外轉(zhuǎn)錄后顯微注射至C57BL/6小鼠受精卵細(xì)胞。小鼠出生后取其基因組DNA進(jìn)行測序以鑒定基因型，同時(shí)取小鼠心、肝、脾、肺、腎等臟器研磨后提取總RNA，通過real-time PCR分析miRNA-29b1在這些臟器中的表達(dá)。

　　結(jié)果：設(shè)計(jì)了20 bp的miRNA-29b1sgRNA并與Cas9一起進(jìn)行了體外轉(zhuǎn)錄，顯微注射小鼠受精卵細(xì)胞后獲得miRNA-29b1基因突變小鼠。測序結(jié)果表明突變小鼠有兩種基因型，一種為10 bp的缺失突變；另一種為22 bp的缺失突變，同時(shí)伴有3 bp的插入突變。與野生型小鼠相比，基因突變小鼠心、肝、脾、肺、腎等組織中miRNA-29b1表達(dá)量下降明顯。

　　結(jié)論：應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)成功構(gòu)建miRNA-29b1基因敲除小鼠。