目的:探討小鼠DNAJB13與HK1是否具有相互作用。
方法:應(yīng)用雙酶切連接方法構(gòu)建pGEX-4T-1/Dnajb13原核表達(dá)載體,測(cè)序驗(yàn)證;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5α,用IPTG誘導(dǎo)融合蛋白GST-DNAJB13表達(dá),采用SDS-PAGE考馬斯亮藍(lán)染色和 Western blotting分析蛋白和鑒定;提取小鼠睪丸蛋白,采用GST pull down檢測(cè)DNAJB13與HK1是否具有相互作用。
結(jié)果:成功構(gòu)建pGEX-4T-1-Dnajb13重組質(zhì)粒,測(cè)序結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列一致;轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒的大腸桿菌在37 ℃,IPTG濃度1 mmol/L誘導(dǎo)下高效表達(dá)融合蛋白;GST pull down檢測(cè)結(jié)果陽性,顯示DNAJB13與HK1存在相互作用。
結(jié)論:在小鼠睪丸中,DNAJB13與 HK1存在相互作用,可能參與精子形成和精子運(yùn)動(dòng)。