目的 構(gòu)建免疫系統(tǒng)人源化的小鼠模型,并移植入人前列腺癌細(xì)胞系,以期用于前列腺癌免疫治療藥物研究。
方法 利用Ficoll密度梯度離心法,從新鮮的人外周血中分離出單個(gè)核細(xì)胞(peripheral bod mononucear cell,PBMC),經(jīng)尾靜脈注射 NPG小鼠,構(gòu)建具有人免疫系統(tǒng)的小鼠模型。注射后第3、4、5、6周分別采用斷尾法采集小鼠外周血,并用流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)小鼠外周血中人CD45++CD3+T細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化水平。在注射后第3周給予小鼠皮下移植1×10'個(gè)前列腺癌2R1細(xì)胞,每周兩次監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)情況。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至1000 mm2左右,對(duì)小鼠施行安樂(lè)死;利用流式細(xì)胞術(shù)、免疫組化、HE染色等方法分析人源化小鼠外周血、脾及腫瘤組織中人免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。
結(jié)果 模型小鼠在移植人PBMC后3~6周期間,外周血中檢測(cè)到較高水平的CD45+CD3+T細(xì)胞。第6周時(shí)處死小鼠,HE染色和免疫組化染色結(jié)果表明,模型小鼠的脾和腫瘤組織中具有人CD4+、CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)。
結(jié)論 成功構(gòu)建了前列腺癌免疫人源化小鼠模型,其外周血、脾及前列腺癌腫瘤組織中均有高水平的人源性T細(xì)胞浸潤(rùn),為下一步構(gòu)建良好的前列腺癌免疫治療臨床前模型奠定了基礎(chǔ)。