HPLC與經(jīng)典LC區(qū)別

 主要區(qū)別：
       固定相差別，輸液設(shè)備和檢測手段。
       1.LC：僅作為一種分離手段；
       ①柱內(nèi)徑1~3cm，固定相粒徑>100μm且不均勻；
       ②常壓輸送流動相；
       ③柱效低（H↑，n↓）；
       ④分析周期長；
       ⑤無法在線檢測；
       2.HPLC：分離和分析；
       ①柱內(nèi)徑2~6mm，固定相粒徑<10μm（球形，勻漿裝柱）；
       ②高壓輸送流動相；
       ③柱效高（H↓，n↑）；
       ④分析時間大大縮短；    
       ⑤可以在線檢測；


       HPLC與GC差別

       相同：
       兼具分離和分析功能，均可以在線檢測；
       主要差別：
       分析對象的差別和流動相的差別；
       1.分析對象
       GC：
       ①能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品；
       ②高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品不可檢測，占有機(jī)物的20%；
       HPLC：
       ①溶解后能制成溶液的樣品；
       ②不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制；
       ③分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分子；
       ④和離子型樣品均可檢測；
       ⑤用途廣泛，占有機(jī)物的80%；
       2.流動相差別
       GC：
       ①流動相為惰性氣體；
       ②組分與流動相無親合作用力，只與固定相作用；
       HPLC：
       ①流動相為液體；
       ②流動相與組分間有親合作用力，為提高柱的選擇性、改善分離度增加了因素，對分離起很大作用；
       ③流動相種類較多，選擇余地廣；
       ④流動相極性和pH值的選擇也對分離起到重要作用；
       ⑤選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相；
       ⑥可以增大分離選擇性；
       3.操作條件差別
       GC：
       加溫操作；
       HPLC：
       ①室溫；
       ②高壓；（粘度大，峰展寬?。?/span>


      HPLC法中分離條件的選擇

       1.固定相與裝柱方法的選擇：
       選粒徑小的、分布均勻的球形固定相（dp≤10μm）；
       首選化學(xué)鍵合相，勻漿法裝柱；
       2.流動相及其流速的選擇：
       選粘度小、低流速的流動相—甲醇，1mL/min；
       3.柱溫的選擇：
       選室溫25℃左右；

  各類高效液相色譜法 

       (一)液固吸附色譜法（LSC）      
        流動相為液體，固定相為固體吸附劑；
       1．分離機(jī)制：
       利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力差異； 
       分離前提：
       K不等或k不等；
       2．固定相：
       與LC比，固定相粒徑不同（<10μm）； 
       3．流動相：
       底劑（烷烴）+有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑；   
       ※例：正己烷或庚烷+氯仿。。。
       4．影響K的因素：
       與固定相性質(zhì)和流動相性質(zhì)有關(guān)；
       溶質(zhì)分子極性↑，洗脫能力↓，k↑，tR↑；
       溶劑系統(tǒng)極性↑，洗脫能力↑，k↓，tR↓；
       注：調(diào)節(jié)溶劑極性，可以控制組分的保留時間；
       5．出柱順序：
       強(qiáng)極性組分后出柱，弱極性組分先出柱；
       6．硅膠吸水量↑，LSC→LLC
       硅膠含水量較小，吸附色譜，硅膠極性較大；
       硅膠含水量>17% ，分配色譜，硅膠失活→載體；
       吸附的水→固定液
       (二)液-液分配色譜法（LLC）
       1．分離機(jī)制：
       利用組分在兩相中溶解度的差異
       2．固定相：
       載體+固定液（物理或機(jī)械涂漬法）
       缺點(diǎn)：
       系統(tǒng)內(nèi)部壓力大，易流失，不實用
       固定液-極性→NLLC
       固定液-非極性→RLLC
       3.①正相色譜-固定液極性>流動相極性（NLLC）
       極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱：適于分離極性組分；
       ②反相色譜-固定液極性<流動相極性（RLLC）
       極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱：適于分離非極性組分；
       (三)化學(xué)鍵合相色譜法（BPC）
       1.化學(xué)鍵合相 
       （1）分離機(jī)制：
       分配+吸附（以LLC為基礎(chǔ)）；
       （2）特點(diǎn)：
        1）不易流失；
        2）熱穩(wěn)定性好；
        3）化學(xué)性能好；
        4）載樣量大；
        5）適于梯度洗脫；
       2.反相鍵合相色譜
       （1）分離機(jī)制：
       疏溶劑理論； 
       正相-流動相與溶質(zhì)排斥力強(qiáng)，作用時間↑，K↑，組分tR↑；
       反相-流動相與溶質(zhì)排斥力弱，作用時間↓，K↓，組分tR↓；
       （2）固定相：
       極性小的烷基鍵合相；
       C8柱，C18柱（ODS柱-HPLC約80%問題）；
       （3）流動相：
       極性大的甲醇-水或乙腈-水；
       流動相極性>固定相極性；
       底劑+有機(jī)調(diào)節(jié)劑（極性調(diào)節(jié)劑）；
       例：水+甲醇，乙腈，THF；
       （4）流動相極性與k的關(guān)系：
       流動相極性↑，洗脫能力↓，k↑，組分tR↑
       （5）出柱順序：
       極性大的組分先出柱；
       極性小的組分后出柱；
       （6）適用：
       非極性~中等極性組分（HPLC 80%問題）
       3.正相鍵合相色譜
       (1)分離機(jī)制：
       溶質(zhì)分子與固定相之間定向作用力、誘導(dǎo)力、或氫鍵作用力
       (2)固定相：
       極性大的氰基或氨基鍵合相；
       (3)流動相：
       極性?。ㄍ琇SC）；底劑+有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑； 
       例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇；
       (4)流動相極性與K的關(guān)系：
       流動相極性↑，洗脫能力↑，組分tR↓，k↓；
       (5)出柱順序：
       結(jié)構(gòu)相近組分，極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱；
       (6)適用：
       氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍?。蛛x物質(zhì)也相似；
       氨基鍵合相與硅膠性質(zhì)差別大，堿性，分析極性大物質(zhì)、糖類等；
       4.離子對色譜和離子抑制色譜
       反相離子對色譜法（IPC或PIC） 
       反相色譜中，在極性流動相中加入離子對試劑，使被測組分與其中的反離子形成中性離子對，增加K和tR，以改善分離；
       (1)離子對試劑：
       烷基磺酸鈉→分析堿
       四丁基季胺鹽→分析酸
       (2)影響K的因素:
       a．與m的極性有關(guān)（同反相色譜）；
       b．與R的鏈長有關(guān)：R↑長，極性↓小，tR↑，k↑；
       (3)適用：
       較強(qiáng)的有機(jī)酸、堿；
       反相離子抑制色譜；
       在反相色譜中，通過加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動相pH值，抑制；
       組分解離，增加其K和tR，以達(dá)到改善分離目的；
       1）離子抑制劑：
       弱酸、弱堿性物質(zhì)；
        pH一定的緩沖溶液；
       2）K的影響因素：
       與流動相極性有關(guān)，還與pH值有關(guān)；
       選擇流動相：
       應(yīng)同時考慮極性及pH值； 
       酸性物質(zhì)-加入酸HAc，tR↑，K↑； 
       堿性物質(zhì)-加入堿NH3·H2O，tR↑，K↑；  
       調(diào)節(jié)pH范圍：
       3.0~8.0；
       pH>8.0破壞鍵合相與載體的結(jié)合；
       pH<3.0腐蝕柱子；
       3）適用：
       極弱酸堿物質(zhì)；
       pH=3~7弱酸；
       pH=7~8弱堿；
       兩性化合物；