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肝組織的VEGF免疫組化方法

方法一:


       1、  白片(石蠟切片)放于處理好的載玻片上,烤片60度1h(此載玻片未經(jīng)粘片劑處理)


       2、  二甲苯5min *3


       3、  異丙醇5min *3


       4、  乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min


       5、  雙蒸水洗3min*3


       6、  丙酮洗3 次


       7、  APES膠立式染缸1-3min


        8、  丙酮洗


  9、  雙蒸水沖3次


  10、  PBS洗5min


  11、  3%雙氧水10-15min


        12、  PBS洗5min


        13、  抗原修復(微波加熱法)


       14、  PBS沖5min*3次


       15、  非免疫性動物血清50ul封閉


       16、  甩去血清,加入50ul一抗,室溫下60min


       17、  PBS沖洗5min*3次


       18、  加入50ul二抗,室溫下20min


       19、  PBS沖5min*3次


       20、  ABC復合物50ul,室溫下20-30min


       21、  PBS沖5min*3次


       22、  DAB顯色液3-10min


       23、  雙蒸水洗1min*2次


       24、  蘇木素復染0.5-1min


       25、  自來水洗30min


       26、  封片

方法二:


       1、  白片放于處理好的載玻片上,烤片60度5d (此載玻片經(jīng)粘片劑APES處理)


       2、  二甲苯5min *3


       3、  異丙醇5min *3


       4、  乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min


       5、  雙蒸水洗3min*3


       6、  雙氧水10-15min


       7、  PBS洗5min


 8、  抗原修復(微波加熱法)


       9、  PBS沖5min*3次


       10、  非免疫性動物血清50ul封閉


       11、  甩去血清,加入50ul一抗,室溫下60mi


 12、  PBS沖洗5min*3次


 13、  加入50ul二抗,室溫下20min


       14、  PBS沖5min*3次


       15、  ABC復合物50ul,室溫下20-30min


       16、  PBS沖5min*3次


       17、  DAB顯色液3-10min


       18、  雙蒸水洗1min*2次


       19、  蘇木素復染0.5-1min


       20、  自來水洗30min


       21、  封片

抗原修復用微波加熱法:


       1、0.01M檸檬酸—檸檬酸鹽緩沖液放入微波爐內(nèi)加熱至沸騰


 2、脫蠟水化后組織置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,再中檔繼續(xù)處理15min


       3、取出波爐盒,室溫放置20min


       4、取出切片架,用PBS沖洗3次,后滴加50ul非免疫性動物血清

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