方法一:
1、 白片(石蠟切片)放于處理好的載玻片上,烤片60度1h(此載玻片未經(jīng)粘片劑處理)
2、 二甲苯5min *3
3、 異丙醇5min *3
4、 乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min
5、 雙蒸水洗3min*3
6、 丙酮洗3 次
7、 APES膠立式染缸1-3min
8、 丙酮洗
9、 雙蒸水沖3次
10、 PBS洗5min
11、 3%雙氧水10-15min
12、 PBS洗5min
13、 抗原修復(微波加熱法)
14、 PBS沖5min*3次
15、 非免疫性動物血清50ul封閉
16、 甩去血清,加入50ul一抗,室溫下60min
17、 PBS沖洗5min*3次
18、 加入50ul二抗,室溫下20min
19、 PBS沖5min*3次
20、 ABC復合物50ul,室溫下20-30min
21、 PBS沖5min*3次
22、 DAB顯色液3-10min
23、 雙蒸水洗1min*2次
24、 蘇木素復染0.5-1min
25、 自來水洗30min
26、 封片
方法二:
1、 白片放于處理好的載玻片上,烤片60度5d (此載玻片經(jīng)粘片劑APES處理)
2、 二甲苯5min *3
3、 異丙醇5min *3
4、 乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min
5、 雙蒸水洗3min*3
6、 雙氧水10-15min
7、 PBS洗5min
8、 抗原修復(微波加熱法)
9、 PBS沖5min*3次
10、 非免疫性動物血清50ul封閉
11、 甩去血清,加入50ul一抗,室溫下60mi
12、 PBS沖洗5min*3次
13、 加入50ul二抗,室溫下20min
14、 PBS沖5min*3次
15、 ABC復合物50ul,室溫下20-30min
16、 PBS沖5min*3次
17、 DAB顯色液3-10min
18、 雙蒸水洗1min*2次
19、 蘇木素復染0.5-1min
20、 自來水洗30min
21、 封片
抗原修復用微波加熱法:
1、0.01M檸檬酸—檸檬酸鹽緩沖液放入微波爐內(nèi)加熱至沸騰
2、脫蠟水化后組織置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,再中檔繼續(xù)處理15min
3、取出波爐盒,室溫放置20min
4、取出切片架,用PBS沖洗3次,后滴加50ul非免疫性動物血清